Biopsia tumoral y muestras de plasma
Para realizar con éxito una prueba de mutación del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), se requiere una cantidad suficiente de células tumorales para garantizar que se extraiga una cantidad adecuada de ADN tumoral para el análisis.1–3 Los dos tipos de muestras principales utilizados para evaluar el estado de mutación de EGFR es una biopsia tumoral y muestras de ADN tumoral circulante (ctDNA) obtenidas de sangre (plasma).
Muestra de biopsia de tumor
En el momento del diagnóstico de cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP) avanzado, una biopsia tumoral es el tipo de muestra preferido para evaluar el estado de mutación de EGFR. En caso de progresión de la enfermedad tras el tratamiento con un inhibidor de la tirosina quinasa (TKI) del EGFR, se recomienda una biopsia del tumor.10
Es importante que se sigan las pautas al obtener, fijar y manipular muestras de biopsias de tumores, y al realizar una prueba de mutación de EGFR:1,11,12
- Los laboratorios deben seguir buenas prácticas de laboratorio, estar completamente validados para realizar pruebas de mutación de EGFR e implementar esquemas de garantía de calidad.
- El sitio de la biopsia debe ser seleccionado por el médico que realizará la biopsia y, en general, la biopsia debe tomarse del sitio del tumor o metástasis más apropiado o de fácil acceso.
- Se pueden usar varias técnicas de biopsia tumoral bien establecidas para obtener muestras tumorales de alta calidad: biopsia central con aguja, biopsia transbronquial, biopsia endobronquial, biopsia con aguja guiada por tomografía computarizada, mediastinoscopia, cirugía torácica asistida por video y toracotomía.
- Se recomienda que las muestras sean fijadas en formalina, incluidas en parafina o frescas, congeladas o fijadas con alcohol. El fijador óptimo es formalina tamponada neutra al 10% y el tiempo de fijación debe ser de 6 a 12 horas para muestras pequeñas y de 8 a 18 horas para muestras quirúrgicas más grandes.
- Se debe determinar el contenido de células cancerosas y la cantidad y calidad de ADN de las muestras, y establecer la proporción mínima y el número de células cancerosas necesarias para la detección de mutaciones durante la validación.
Muestras de ctDNA (plasma)
En muchos pacientes con NSCLC avanzado, el ctDNA está presente en la sangre.13 En el diagnóstico primario de NSCLC avanzado, cuando no se dispone de una biopsia del tumor, el ctDNA de muestras de sangre (plasma) ofrece una alternativa para evaluar el estado de mutación de EGFR.
Según los resultados del estudio de fase IV IFUM, gefitinib fue el primer EGFR-TKI que permitió el uso de ctDNA (obtenido de una muestra de sangre) para evaluar el estado de mutación de EGFR en el momento del diagnóstico en aquellos pacientes en los que no se disponía de una muestra del tumor ( solo etiqueta de la UE).3,14
Después de la progresión de la enfermedad con un EGFR-TKI aprobado, puede ser más difícil obtener una biopsia del tumor que en el diagnóstico primario. Una muestra de ctDNA obtenida de sangre (plasma) ofrece una alternativa menos invasiva y potencialmente más rápida para las pruebas de mutación de EGFR.
El estudio de Fase II AURA2 evaluó la actividad y la seguridad del EGFR-TKI de tercera generación, osimertinib, en pacientes que habían progresado después del tratamiento con un EGFR-TKI aprobado. Este estudio apoyó la necesidad de la biopsia en el momento de la progresión de la enfermedad.15
Para las pruebas de ctDNA, para evitar la coagulación de la sangre y la lisis celular, se pueden usar tubos con EDTA si la muestra de sangre se va a procesar rápidamente; sin embargo, los tubos de recolección de estabilización brindan una alternativa cuando esto no es posible (p. ej., tubos de recolección de sangre Streck Cell-Free DNA). , tubos de recogida de ADN sin células de Roche, tubos PAXgene Blood ccf-DNA).16-18
Tenga en cuenta: no se deben utilizar tubos de recogida de heparina, ya que esto puede interferir con las aplicaciones de PCR posteriores.21
Referencias:
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- El Messaoudi S et al. Circulating cell free DNA: preanalytical considerations. Clin Chim Acta 2013; 424: 222–230.
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Precisión
Hay varias pruebas de mutación de EGFR diferentes y la elección de la prueba debe basarse principalmente en el tipo de muestra disponible. También se debe tener en cuenta la experiencia de laboratorio relevante y el equipo disponible.
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